Loading buffer 的配比和配置方法 |
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Loading buffer 的中文名字叫上样缓冲液
对于琼脂糖凝胶: 6*的缓冲液中可以显示两条带,前面的蓝色的条带是溴酚蓝,代表的片段大小是 300bp,后面的有点绿色的条带是二甲苯青,代表的片段大小在4000bp左右。 功能主要有两个: 第一, 里边的指示剂溴酚蓝和二甲苯酚起到指示的作用,显示电泳的进程,以便我们适时终止电泳; 第二, 第二,里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔。另外,有的Buffer是加有SDS的,一般都会写明。SDS主要是促使聚合酶变性,因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的迁移速率。 6×loading buffer 一般配置: 30mM EDTA 36%(v/v) Glycerol (甘油) 0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF (二甲苯青FF) 0.05%(w/v) Bromophenol BLUE (溴酚蓝) 对于SDS-PAGE: 5×SDS-PAGE Loading Buffer组份浓度: 250mM Tris-HCl(pH6.8) 10%(W/V) SDS 0.5%(W/V) BPB 50%(V/V)甘油 5%(W/V)β-巯基乙醇 配制量: 5mL 配制方法: 1. 量取下列试剂,置于10mL塑料离心管中。 1M Tris-HCl 1.25mL SDS0.5g BPB25mg 甘油 2.5mL 2.加入去离子水溶解后定容至5mL。 3.小份(500μl/份)分装后,于室温保存。 4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。 5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右 |
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